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原标题：【技术分享】常见养殖品种无菌分离细菌方法

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当水产养殖动物发生疑似细菌性疾病时，我们需要从发病的养殖动物体内或病灶处接种，进行细菌分离培养，以确定是否感染细菌及感染哪一种或哪一类细菌，从而为快速做出临床诊断和后续治疗提供参考依据。那么如何在药店或塘口进行细菌分离培养呢， 下面我们就来看看常见养殖品种无菌分离的操作方法。

一、常见养殖品种细菌分离

1、鱼类

取病鱼放在解剖盘里，先接种体表创伤处，之后使腹部向上，用在酒精灯火焰上灼烧灭菌的解剖剪在肛门前横向剪开一条小口，再从小口处沿腹中线经鳍中间剪到下颌处，避免内脏完全暴露在空气中，先接种肝、脾及腹水，每次接种细菌时用灼烧过的镊子掀起遮盖内脏的肌肉，接种完后再盖回去，之后鱼按左头右尾、背上腹下的方式摆放，用镊子提起上侧体壁，从肛门开始，向侧线的方向用剪刀剪出弧形切口，到达侧线就扭转剪刀方向，向前延伸至鳃盖的后缘，再沿着鳃盖后缘，剪到胸鳍前面的腹中线处，移去上侧体壁，再接种肾脏，之后根据需求再接种脑。

图1 接种泥鳅肝脏

2、虾类

用在酒精灯灼烧灭菌后的镊子从病虾头胸甲后缘紧贴甲壳插入甲壳内部并慢慢来回晃动，直至头胸甲与内脏完全剥离，再用灼烧灭菌后的剪刀剪开包裹肝胰腺的膜，用灼烧灭菌后的接种针从缝隙中插入接种肝胰腺，进行划线培养；之后用在酒精灯灼烧灭菌后的小剪刀在病虾任一体节处剪一条伤口，用灼烧灭菌后的接种针从伤口处插入接种肌肉。

图2 接种对虾肝胰腺

图3 接种对虾肌肉

3、蟹类

先将蟹头胸甲揭开适宜角度，用灼烧灭菌后的接种针接种肝胰腺，进行划线培养；之后用在酒精灯灼烧灭菌后的小剪刀在病蟹任一位置处剪掉鳃及蟹壳，露出肌肉，用灼烧灭菌后的接种针插入肌肉接种。

图4 接种河蟹肝胰腺

图5 接种河蟹肌肉

二、注意事项

1、接种过程中尽量不要对着鱼体及打开的培养皿说话，避免口腔中的细菌产生污染。

2、接种鱼体体表伤口处细菌时可先用酒精棉球擦拭伤口边缘，再在伤口边缘处接种细菌，保证分离的细菌是造成体表创伤的病原菌，而不是杂菌。

3、灼烧接种针时要确保接种环发红后才可以离开火焰，防止灼烧不彻底导致杂菌污染。

4、灼烧接种针后，可以轻触培养皿或待接种组织，接种针冷却后再接种组织，避免烫死致病菌，影响细菌分离结果。

5、酒精灯燃烧过程中会在一定范围内形成一个无菌环境，在不被烫伤的安全范围内，操作时尽量靠近火焰。

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